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Western Blot解决方案
添加时间:2019-08-27

  Western blot作为最常用的蛋白质定性定量检测技术,几乎应用于所有分子、细胞、组织研究实验室,其结果的质量直接影响了我们对科研数据的判断。不论你从事心血管、神经、免疫或者其他领域的研究,可能都会用到western blot技术,沃鎏波洱为科研人员推荐以下针对WB的解决方案,涉及经过广大科学工作者检验的仪器和试剂:

  流程:

  推荐产品(试剂、耗材)品牌货号说明PicID

  样本制备样本裂解RIPA Lysis and Extraction Buffer (RIPA裂解液)Thermo Scientific89900用于细胞和组织的裂解/images/goods//1540290128585.jpg2712990

  Cell Lysis Buffer (10 X)CST9803S普通细胞裂解液,在非变性条件下对细胞进行裂解:胞质蛋白、膜结合蛋白、用于IP/images/brand//1532681633005.png7843204

  蛋白质定量BCA蛋白定量检测试剂盒天根PA115BCA法进行蛋白质定量具有便捷快速、灵敏准确、兼容性好的特点/images/brand//1532338019134.png"2720718

  上样缓冲液SD-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)碧云天P0015L以溴酚蓝为染料,经过改良的5倍浓缩蛋白上样缓冲液;含少量DTT,不含巯基乙醇;国产大品牌/images/brand//1530152720714.png7843231

  蛋白酶抑制剂cocktailPierce Protease Inhibitor Mini TabletsThermoA32953细胞里蛋白酶种类很多,需要加cocktail形式的抑制剂。同样推荐Roche #4693116001/images/goods/68295.jpg2710964

  电泳凝胶试剂盒SDS-PAGE凝胶配制试剂盒碧云天P0012A国产大品牌/images/brand//1530152720714.png7525319

  蛋白ladderPageRuler™ Prestained Protein Ladder, 10 to 180 kDaThermo Scientific26616该系列蛋白质marker/ladder是明星产品。满足常规需求。/images/goods/53676.jpg2711628

  转膜膜的选择0.45um transfer membranesMerck MilliporeIPVH00010PVDF膜适用于SDS存在下与蛋白质的结合,可用考马斯亮蓝染色,机械韧性好,转膜前需用100%甲醇浸泡;0.45um适用于一般蛋白(大于20kD)/images/goods//1536312418791.jpg3051217

  封闭/抗体孵育内参抗体β-Actin AntibodyCST

  4970Sβ-Actin为常用内参蛋白,分子量为45kD/images/brand//1532681633005.png7458

  GAPDH AntibodyGeneTexGTX100118GAPHD为常用内参蛋白,分子量为37kD/images/brand//1519893010937.jpg5494516

  二抗Anti-rabbit IgG, HRP-linked AntibodyCST7074P2二抗选择时注意一抗的种属来源;WB中常用HRP或AP偶联的二抗/images/brand//1532681633005.png2504063

  显影化学发光底物ECL Western Blotting Substrate KitThermo Scientific

  32209ECL底物为增强型化学发光底物,用于抗体上HRP的检测;Thermo Scientific Pierce品牌值得信赖且价格经济/images/goods/67410.jpg2684559

  仪器推荐:Bio-rad 电泳套装 (#1645050,#1658001,#1703930)蛋白质电泳界最常用、值得信赖的大品牌电泳套装